Metodat për përcaktimin e përmbajtjes së proteinave të qumështit pritës. Përcaktimi i pjesës masive të proteinës me metodën Kjeldahl

Metoda bazohet në faktin se një zgjidhje ujore neutrale e aminoacideve në prani të formalinës neutrale është në gjendje të rrisë aciditetin me formimin e komponimeve në të cilat të dy hidrogjenët e grupit amino zëvendësohen nga një grup metil.

Materialet dhe reagentët

Balona me kapacitet 50-100 cm 3; biretë; pipeta me kapacitet 10 cm 3; tretësirë ​​alkoolike e fenolftaleinës 1%; 0,1 n zgjidhje alkali; formalinë neutrale.

Kryerja e një analize

Në një balonë 50-100 cm 3, 10 cm 3 qumësht maten me një pipetë, shtohen 10 pika tretësirë ​​alkoolike 1% të fenolftaleinës, gjithçka përzihet dhe titrohet me një tretësirë ​​alkali 0,1 N derisa të marrë një ngjyrë pak rozë. nuk zhduket kur tundet. Shtoni 2 cm 3 formalinë neutrale në balonë, përzieni. Ngjyra rozë e zbehtë zhduket.

Niveli i alkalit shënohet në biretë, përmbajtja e balonës titrohet sërish në të njëjtën ngjyrë rozë të zbehtë si herën e parë, si dhe herën e parë, e cila nuk zhduket me trazim.

Bëni një lexim në biretë, duke treguar sasinë prej 0,1 n tretësirë ​​alkali që shkoi në titrimin e përzierjes në balonë dhe llogaritni përmbajtjen e proteinës totale dhe kazeinës në qumësht. Për të përcaktuar përmbajtjen e proteinës totale, sasia prej 0,1 n tretësirë ​​alkali që përdoret për titrim, pas shtimit të formalinës, shumëzohet me një faktor 1,92 dhe për të përcaktuar përmbajtjen e kazeinës, me një faktor 1,51.

8.2 Metoda refraktometrike për përcaktimin e proteinave (GOST 25179-90)

Metoda refraktometrike bazohet në matjen e indekseve refraktive të qumështit dhe hirrës pa proteina të marra nga e njëjta mostër qumështi, diferenca ndërmjet të cilave është drejtpërdrejt proporcionale me fraksionin masiv të proteinave në qumësht.

Pajisjet, materialet dhe reagentët

Refraktometër me një shkallë të fraksionit masiv të proteinës në intervalin 0 - 15%, vlera e ndarjes 0,1%; banjë me ujë të tipit të mbyllur për shishka; centrifugë për matjen e pjesës masive të yndyrës në qumësht; sobë elektrike; balona me kapacitet 1000 cm 3; pipeta, me kapacitet 1 dhe 5 cm 3; shishe nga një tub qelqi për ilaçe, me një kapacitet 10 cm 3; priza gome sipas dokumentacionit normativ dhe teknik; klorur kalciumi 2-ujor; uje i distiluar.

Përgatitja për matje

Një pjesë prej 40,0 g klorur kalciumi vendoset në një balonë me kapacitet 1000 cm 3, i shtohen 500 cm 3 ujë dhe përzihen derisa kripa të tretet plotësisht. Përmbajtja e balonës nxehet në një temperaturë prej 20 ± 2 ° C dhe rregullohet me ujë në shenjë.

Marrja e matjeve

Hidhni në 3 shishe me 5 cm 3 qumësht, shtoni 6 pika tretësirë ​​të një tretësire 4% të klorurit të kalciumit. Shishet mbyllen dhe përmbajtja e tyre përzihet duke përmbysur shishet. Vendosni shishet në një banjë uji, duke derdhur ujë në banjë në mënyrë që niveli i saj të arrijë gjysmën e lartësisë së shisheve. Banja mbyllet, vendoset në sobë elektrike, uji në banjë vihet në valë dhe zihet të paktën 10 minuta. Pa e hapur vaskën, hidhni ujë të nxehtë nëpër vrimat në kapak, derdhni ujë të ftohtë në banjë dhe mbajeni në të për të paktën 2 minuta.

Hapni banjën, hiqni shishet dhe thyeni mpiksjen e proteinave duke tundur fuqishëm shishet. Flakonet vendosen në një centrifugë dhe centrifugohen për të paktën 10 minuta. Serumi transparent që rezulton merret me pipetë dhe aplikohet në prizmin matës të refraktometrit 1-2 pika. Mbyllni ndriçimin e prizmit matës. Duke vëzhguar përmes okularit të një refraktometri, ngjyrosja e kufirit të dritës dhe hijes hiqet me një korrigjues të veçantë. Për të përmirësuar mprehtësinë e kufirit, matja kryhet 1 min pas aplikimit të serumit në prizëm, pasi gjatë kësaj kohe ajri hiqet nga kampioni dhe sipërfaqja e prizmit ndriçues laget më mirë. Kryeni të paktën 3 vëzhgime në shkallën "Proteina". Hiqeni serumin nga prizmi i refraktometrit, lajeni me ujë dhe fshijeni me letër filtri.

2 pika nga qumështi i hulumtuar vendosen në prizmin matës dhe bëhen të paktën 5 vëzhgime në shkallën "Proteinë", pasi mprehtësia e kufirit të dritës dhe hijes në qumësht është më e keqe se në hirrë. Llogaritni mesataren aritmetike të rezultateve të vëzhgimeve për hirrën dhe qumështin.

Përpunimi i rezultateve

Pjesa masive e proteinave në qumësht (X 1) si përqindje llogaritet me formulën:

X 1 \u003d X 2 - X 3, (8.2)

ku X 2 - mesatarja aritmetike e rezultateve të vëzhgimeve në shkallën "Proteina" për qumështin,%;

ХЗ - mesatarja aritmetike e rezultateve të vëzhgimeve në shkallën "Proteina" për serumin, %.

Kufiri i gabimit të lejuar të rezultatit të matjes është ± 0,1% e fraksionit të masës së proteinës me një probabilitet besimi prej 0,90 dhe mospërputhja midis dy përcaktimeve paralele nuk është më shumë se 0,1% e fraksionit të masës së proteinës.

Rezultati përfundimtar i matjes merret si mesatarja aritmetike e rezultateve të dy llogaritjeve paralele të fraksionit të masës së proteinave, duke e rrumbullakosur rezultatin në numrin e dytë dhjetor.

Në qumështin e papërpunuar të lopës, sipas Ligjit Federal "Rregulloret Teknike për Qumështin dhe Produktet e Qumështit", pjesa masive e proteinave duhet të jetë në intervalin 2.8-3.6%, por jo më pak se 2.8%. Norma bazë e fraksionit masiv të proteinës është 3.0%.

GOST 10846-91

Grupi C19

STANDARD NDËRSHTETOR

DHITRA DHE PRODUKTET E PËRPUNIMIT TË TIJ

Metoda e përcaktimit të proteinave

Drithërat dhe produktet e përpunimit të tij.
Metoda për përcaktimin e proteinave

OKSTU 9709

Data e hyrjes 1993-06-01

TË DHËNAT E INFORMACIONIT

1. ZHVILLUAR DHE PARAQITUR nga VNPO "Zernoprodukt"

Zhvilluesit

G.S.Zelinsky, Ph.D. teknologjisë. shkencat; K.A.Churusov, Ph.D. teknologjisë. shkencat (udhëheqës i temës); N.M.Yaskina, Ph.D. biol. shkencat; M.I. Shvartsman, Ph.D. teknologjisë. shkencat; A.F. Shchukhnov, Ph.D. teknologjisë. shkencat; E.V. Solomonova; I.A.Verezhnikova; J. B. Levinton; I.D. Zvenigorodskaya; N.P. Levitskaya; L.P. Zeltsman

2. MIRATUAR DHE PARAQITUR ME Dekret të Komitetit të Standardizimit dhe Metrologjisë së BRSS, datë 18.12.91 N 1995.

3. ZËVENDËso GOST 10846-74

4. RREGULLORET E REFERENCAVE DHE DOKUMENTET TEKNIKE

5. RILESHIM

Është bërë një ndryshim, i botuar në IUS N 6 për 2006

Ndryshimi është bërë nga prodhuesi i bazës së të dhënave sipas tekstit të IUS N 6 për 2006



Ky standard ndërkombëtar zbatohet për drithërat dhe produktet e tij dhe vendos një metodë për përcaktimin e proteinave.

Thelbi i metodës qëndron në mineralizimin e lëndës organike me acid sulfurik në prani të një katalizatori me formimin e sulfatit të amonit, shkatërrimin e sulfatit të amonit me alkalin me çlirimin e amoniakut, zhveshjen e amoniakut me avujt e ujit në një tretësirë ​​e acidit sulfurik ose borik, e ndjekur nga titrimi.

1. METODAT E MOSTRAVE

1. METODAT E MOSTRAVE

1.1. Marrja e mostrave të grurit - sipas GOST 13586.3.

1.2. Marrja e mostrave të drithërave - sipas GOST 26312.1.

1.3. Marrja e mostrave të miellit dhe krundeve - sipas GOST 27668.

2. PAJISJET, MATERIALET DHE REAGENTET

Laboratori i mullirit të markës UI-EML, markës LEM ose markës tjetër, duke siguruar finesën e kërkuar të bluarjes.

Sitë me rrjetë teli N 08 sipas TU 14-4-1374.

Peshore laboratorike për përdorim të përgjithshëm me kufirin e gabimit të lejuar të peshimit ± 0,01 g.

Peshore laboratorike për përdorim të përgjithshëm me një kufi të gabimit të lejuar të peshimit ± 0,001 g.

Kabineti elektrik i tharjes SESh-3M ose një lloj tjetër me një kontrollues të temperaturës që siguron krijimin dhe mirëmbajtjen e temperaturës në zonën e punës të tharjes 100-140 ° C me një gabim prej ± 2 ° C.

Ngrohje elektrike ose ndezës me gaz.

Rezervuari metalik i avullit ose balonë rezistente ndaj nxehtësisë me kapacitet 2000 cm3.

Balonat Kjeldahl, versioni 2, me kapacitet 100, 250 dhe 500 cm3 sipas GOST 25336.

Bureta me kapacitet 25 ose 50 ml.

Flaskë ekzekutimi konik 2 me një kapacitet 250 dhe 500 cm3 në përputhje me GOST 25336.

Balona vëllimore 1 me një kapacitet 500 dhe 1000 cm3 sipas GOST 1770.

Frigoriferi është në formë topi ose me tub të drejtë, versioni 3 sipas GOST 25336.

Eliminatori i pikave KO-60 sipas GOST 25336.

Gypat e qelqit laboratorik me diametër 25 ose 36 mm, lartësi 38 ose 50 mm sipas GOST 25336.

Tuba provë cilindrike me diametër 10 mm, lartësi 90 mm sipas GOST 25336.

Tubat lidhës prej qelqi në përputhje me GOST 25336.

Pika për treguesin.

Llaç porcelani dhe shtypës.

Xhami prej porcelani me një kapacitet prej 1000 cm sipas GOST 9147.

Cilindri matës me kapacitet 1000 cm3 në përputhje me GOST 1770.

Acidi sulfurik i përqendruar sipas GOST 4204, x. orë, dhe një zgjidhje e acidit sulfurik ose një titër standard me një përqendrim prej 0,05 mol / dm.

Hidroksid natriumi sipas GOST 4328, x. h ose h.d.a., një tretësirë ​​me përqendrim masiv 330-400 g / dm dhe një tretësirë ​​e hidroksidit të natriumit me një përqendrim 0.1 mol / dm.

Acidi borik sipas GOST 9656, i pastër analitikisht, dhe një zgjidhje me përqendrim masiv prej 40 g / dm.

Sulfat bakri 5-ujë sipas GOST 4165.

Sulfati i kaliumit sipas GOST 4145.

Peroksid hidrogjeni sipas GOST 10929, zgjidhje ujore me një fraksion vëllimor prej 30%.

Alkooli etilik i korrigjuar sipas GOST 5962 *.
___________________
* Në territorin e Federatës Ruse, zbatohet GOST R 51652-2000.

Ujë i distiluar sipas GOST 6709.

E kuqe metil.

Bromocresol jeshile.

Seleni, h.

3. PËRGATITJA PËR IDENTIFIKIM

3.1. Përgatitja e mostrës për përcaktim

3.1.1. Nga një kampion mesatar i drithit ose i një produkti të përpunimit të tij, me dorë ose me ndihmën e një ndarësi, izolohet (50,0 ± 0,1) g. Kokrrat dhe drithërat pastrohen nga barërat e këqija, me përjashtim të kokrrave ose kokrrave të prishura. Kokrrat ose kokrrat e pastruara bluhen në një mulli laboratorik në mënyrë që i gjithë produkti i bluar të kalojë përmes një sitë rrjetë teli N 08 kur sitet.

Kur bluajeni në mulli, drithërat, përmbajtja e lagështisë së të cilit kalon 17%, thahet paraprakisht në ajër ose në një nga pajisjet e mëposhtme: një kabinet tharjeje, një termostat, një aparat tharjeje laboratori LSA në një temperaturë ajri jo më shumë. se 50 ° C.

3.1.2. Nga një material tërësisht i përzier, merren me radhë dy pjesë të peshuara nga 0,3-0,7 g secila dhe vendosen në një epruvetë të pastër dhe të thatë, duke hyrë lirisht në balonën Kjeldahl. Provëza me kampionin peshohet në një ekuilibër me një gabim prej ± 0,001 g, vendoset sa më thellë që të jetë e mundur në balonën Kjeldahl (për të shmangur spërkatjen e produktit në muret e balonës) dhe produkti derdhet me kujdes nga provëz. Peshohet provëza bosh. Sipas diferencës ndërmjet rezultateve të peshimit të parë dhe të dytë, përcaktohet masa e kampionit.

Për të lehtësuar futjen e një epruvete me një mostër në balonën Kjeldahl, një tub gome vendoset në skajin e mbyllur të epruvetës.

Lejohet peshimi i kampionit në filtër pa hi me përmasa 3x3 cm Filtri me kampion mbështillet dhe vendoset në një balonë Kjeldahl.

Shënim. Kur merrni një kampion në një filtër pa hi në përcaktimin "bosh", filtri digjet detyrimisht.

3.1.3. Njëkohësisht me marrjen e mostrave për analizë, mostrat merren për të përcaktuar përmbajtjen e lagështisë: kokrra - sipas GOST 13586.5, drithëra - sipas GOST 26312.7, miell dhe krunde - sipas GOST 9404.

3.2. Përgatitja e reagentëve dhe tretësirave

3.2.1. Për përgatitjen e katalizatorit 1, peshohen 10,0 g sulfat bakri, 100,0 g sulfat kaliumi dhe 2,0 g selen, kampioni vendoset në një llaç dhe përzierja bluhet mirë derisa të fitohet një pluhur homogjen i grimcuar.

Për përgatitjen e katalizatorit 2, peshohen 10,0 g sulfat bakri dhe 300,0 g sulfat kaliumi, peshohen në llaç dhe përzierja bluhet me kujdes derisa të përftohet një pluhur homogjen i grimcuar.

3.2.2. Për të përgatitur tretësirën treguese, peshoni 0,2 g metil të kuq dhe 0,1 g bromkresol jeshil; shpërndahet kampioni në 100 cm3 etanol 96%.

3.2.3. Për të përgatitur një zgjidhje 0,05 mol / dm të acidit sulfurik, përdoret acidi i koncentruar sipas GOST 25791 dhe titri i acidit sulfurik përdoret në përputhje me standardet dhe rregullat e bashkangjitura në komplet.

3.2.4. Për të përgatitur një zgjidhje të hidroksidit të natriumit 0,1 mol / dm, përdoret hidroksidi i natriumit sipas GOST 4328 dhe titri i hidroksidit të natriumit përdoret në përputhje me standardet dhe rregullat e bashkangjitura në komplet.

3.2.5. Për të përgatitur një tretësirë ​​të acidit borik me një përqendrim masiv prej 40 g / dm, peshohen 40 g acid borik, një mostër tretet në një sasi të vogël uji kur nxehet dhe më pas tretësira transferohet në një balonë vëllimore me kapaciteti 1000 cm 3, vëllimi i të cilit pas ftohjes së tretësirës, ​​rregullohet në shenjë me ujë të distiluar.

4. PËRCAKTIMI

4.1. Shkatërrimi i lëndës organike

4.1.1. Shtoni 1,5-2,0 g katalizator 1 ose 2 në një balonë Kjeldahl me një kampion dhe derdhni me kujdes 10-15 cm acid sulfurik të koncentruar. Përmbajtja përzihet duke tundur balonën, duke arritur lagështimin e plotë të kampionit.

Lejohet të shtohen 7-10 cm3 tretësirë ​​peroksid hidrogjeni me fraksion vëllimor 30% në vend të katalizatorit 1 ose 2 në një balonë Kjeldahl me mostër dhe pas përfundimit të reaksionit të dhunshëm shtohen 7-10 cm3. acid sulfurik i koncentruar.

4.1.2. Ngrohja e balonës kryhet në një kapak tymi ose në një dhomë me ventilim të detyruar.

Një gyp ose mëngë e vogël qelqi futet në qafën e balonës Kjeldahl për të zvogëluar daljen e avullit të acidit gjatë ngrohjes.

Balonja është montuar në një sobë elektrike ose e fiksuar në një trekëmbësh mbi një djegës me gaz në mënyrë që boshti i saj të jetë në një kënd prej 30-45 °.

Ngrohja fillestare e balonës kryhet nën mbikëqyrje në një nxehtësi të ulët të sobës elektrike ose në një flakë të dobët të një djegësi gazi ngadalë, për shkak të formimit të mundshëm të shkumës, e cila mund të ngrihet në qafën e balonës ose edhe të tejmbushet. .

4.1.3. Pasi të pushojë formimi i shkumës, rrisni ngrohjen e balonës dhe zieni përmbajtjen e saj. Intensiteti i mëtutjeshëm i vlimit të tretësirës në balonë duhet të jetë i tillë që avulli i acidit të kondensohet në pjesën e mesme të qafës së balonës Kjeldahl.

Gjatë ngrohjes së balonës, sigurohuni që të mos mbeten grimca të zeza të padjegura të produktit në muret e balonës. Nëse gjenden, ato lahen me një sasi të vogël acidi sulfurik, i cili shtohet në balonë ose duke tundur lehtë përmbajtjen e balonës.

4.1.4. Tretësira në balonë zihet derisa të bëhet e qartë (lejohet një nuancë paksa e gjelbër). Më pas, ngrohja shtesë e balonës kryhet edhe për 30 minuta të tjera, pas së cilës përfundon djegia.

4.1.5. Balona ftohet dhe në përmbajtjen e saj hidhet gradualisht 70 ml ujë të distiluar, duke e tundur pak tretësirën. Zgjidhja që rezulton ftohet përsëri.

4.2. Heqja e amoniakut

4.2.1. Uji i distiluar derdhet në rezervuarin 1 të gjeneratorit të avullit (shih Shtojcën) përmes një hinke 2, duke e mbushur atë me më shumë se gjysmën e vëllimit të rezervuarit. Hapni valvulën 3 dhe kapësin 4.

Ngrohni një rezervuar uji në një sobë elektrike ose djegës me gaz. Bashkangjisni një balonë të zbrazët Kjeldahl 10 në eliminuesin e pikave 7 dhe hinkën e alkalit 5.

Pasi uji në rezervuar të vlojë, mbyllni valvulën 3. Ndizni frigoriferin 8, zëvendësoni një balonë konike të zbrazët 9 nën të dhe "avulloni" pajisjen për 5-10 minuta.

Pas kohës së caktuar, valvulat 3 dhe 6 hapen dhe kapësja 4 mbyllet.

4.2.2. Në një balonë konike me kapacitet 250 cm3, derdhen 20 cm3 tretësirë ​​të acidit borik me përqendrim masiv 40 g / dm3 ose 25 cm3 tretësirë ​​0,05 mol / dm3 acid sulfurik duke përdorur një biretë ose pipetë dhe 4. -Shtohen 5 pika të treguesit. Ata nxjerrin një balonë konike të zbrazët nga poshtë frigoriferit dhe zëvendësojnë një balonë konike me një zgjidhje të acidit borik ose sulfurik.

Balona vendoset nën frigorifer në mënyrë që maja e frigoriferit të zhytet në tretësirë ​​në një thellësi prej të paktën 1 cm.

Nxirreni balonën e zbrazët të Kjeldahl-it dhe zëvendësojeni me enë Kjeldahl me tretësirë.

4.2.3. Mbyllni rubinetin 6 dhe hidhni në hinkë 40 cm tretësirë ​​alkali me përqendrim masiv 330-400 g/dm. Më pas hapni me kujdes rubinetin 6 dhe gradualisht, me një lëkundje të lehtë të balonës Kjeldahl, hidhet alkali në përmbajtjen e balonës.

Në këtë rast, vërehet një ndryshim në ngjyrën e tretësirës në balonën Kjeldahl: nga transparente bëhet blu ose kafe.

4.2.4. Hapet kapësja 4, mbyllen rubinetat 3 dhe 6 dhe distilohet amoniaku, i cili, i distiluar me avull nga balona Kjeldahl, kondensohet në frigorifer dhe futet në balonën konike marrëse me një tretësirë ​​të acidit borik ose sulfurik.

Pas 10 minutash, baloni konik me tretësirën e acidit ulet, ndërsa maja e frigoriferit nuk duhet të prekë lëngun.

Fundi i distilimit vendoset duke përdorur letër lakmus. Për ta bërë këtë, maja e frigoriferit lahet me një sasi të vogël uji të distiluar, balona konike hiqet nga poshtë frigoriferit dhe letra lakmus zëvendësohet nën pikat e kondensatës që rrjedhin nga frigoriferi. Në rastet kur letra e lakmusit nuk bëhet blu, përfundon distilimi i amoniakut. Nëse letra e lakmusit bëhet e kaltër, atëherë balona e marrjes vendoset përsëri nën frigorifer dhe distilimi vazhdon.

4.2.5. Pas përfundimit të distilimit, kapësja 4 mbyllet dhe çezmat 3 dhe 6 hapen.

Lani majën e kondensatorit mbi balonën konike me ujë të distiluar dhe hiqni balonën konike. Balonja Kjeldahl zëvendësohet me një bosh dhe i gjithë sistemi "avullohet" për të hequr çdo amoniak të mbetur.

4.2.6. Kur përdoren balonat Kjeldahl me kapacitet 500 cm3 për djegie, lejohet distilimi i amoniakut pa rezervuar gjeneratori të avullit duke e ngrohur drejtpërdrejt balonën Kjeldahl në një ngrohës elektrik. Përmbajtja e balonës Kjeldahl hollohet me 150-200 ml ujë të distiluar përpara se të distilohet amoniaku, dhe operacionet e mëtejshme të distilimit kryhen siç tregohet në paragrafët 4.2.2-4.2.5.

4.3. Titrimi

4.3.1. Kur amoniaku distilohet në një tretësirë ​​të acidit borik, amoniaku që përmbahet në balonën konike marrëse titrohet me një zgjidhje 0,05 mol / dm të acidit sulfurik derisa ngjyra e treguesit të ndryshojë nga jeshile në rozë.

4.3.2. Kur amoniaku distilohet në një tretësirë ​​të acidit sulfurik, përmbajtja e balonës konike (një tepricë prej 0,05 mol/dm tretësirë ​​e acidit sulfurik) titrohet me tretësirë ​​hidroksidi natriumi 0,1 mol/dm derisa ngjyra të ndryshojë në jeshile.

4.4. Përcaktimi i azotit në reagjentë dhe ujë

4.4.1. Njëkohësisht me përcaktimin e azotit në grurë dhe produktet e përpunimit të tij, kryhet një analizë për zbulimin e kontaminimit të ujit dhe reagentëve me azot (përcaktimi bosh). Për ta bërë këtë, kryeni të gjithë analizën në përputhje me kërkesat e seksionit 4, me përjashtim të marrjes së një kampioni.

4.4.2. Nëse është përdorur një filtër pa hi për marrjen e kampionit, atëherë një filtër i ngjashëm duhet të përdoret gjithashtu në analizë për të zbuluar ndotjen e reagentëve dhe ujit me azot.

4.4.3. Përcaktimi i azotit në reagentë kryhet çdo herë pas zëvendësimit të grupeve të reagentëve.

5. PËRPUNIMI I REZULTATEVE

5.1. Kur amoniaku distilohet në një tretësirë ​​të acidit borik, përmbajtja e azotit () në grurë ose produkte të përpunimit të tij në përmbajtjen aktuale të lagështisë në përqindje llogaritet me formulën

ku është pesha e kampionit, g;

- vëllimi i tretësirës së acidit sulfurik që përdoret për titrimin e amoniakut në tretësirë, cm;

- ndryshimi i titrit prej 0,05 mol / dm tretësirë ​​të acidit sulfurik (kur përgatitet një tretësirë ​​nga acidi sulfurik i koncentruar);

0,0014 - sasia e azotit ekuivalente me 1 cm 0,05 mol / dm tretësirë ​​të acidit sulfurik, g;

- vëllimi i tretësirës 0,05 mol / dm të acidit sulfurik, i cili shkoi në titrim në përcaktimin "bosh",

GOST 25179-90

Grupi H19

STANDARD NDËRSHTETOR

QUMËSHTI

Metodat e përcaktimit të proteinave

Qumështi. Metodat për përcaktimin e proteinave

ISS 67.100.10
OKSTU 9209

Data e hyrjes 1991-01-01

TË DHËNAT E INFORMACIONIT

1. ZHVILLUAR DHE PARAQITUR nga Instituti Gjithë Bashkimi i Kërkimeve dhe Dizajnit Shkencor të Industrisë së Qumështit

Zhvilluesit

O.A. Geraymovich, Ph.D. teknologjisë. shkencat; E.A. Fitisov, Ph.D. bujqësore shkencat; L.V. Andreevskaya

2. MIRATUAR DHE PARAQITUR ME Dekret të Komitetit Shtetëror të BRSS për Menaxhimin e Cilësisë së Produkteve dhe Standardet e datës 1 Shkurt 1990 N 136

3. ZËVENDËso GOST 25179-82

4. RREGULLORET E REFERENCAVE DHE DOKUMENTET TEKNIKE

5. Kufizimi i periudhës së vlefshmërisë u hoq sipas protokollit N 5-94 të Këshillit Ndërshtetëror për Standardizimin, Metrologjinë dhe Certifikimin (IUS 11-12-94)

6. RIPUBLIKIMI. gusht 2009


Ky standard zbatohet për qumështin e papasterizuar me një aciditet jo më të lartë se 20 °T dhe përcakton metodat e mëposhtme për matjen e pjesës masive të proteinës: titrim kolorimetrik, refraktometrik dhe formal.

1. METODAT E MOSTRAVE

1. METODAT E MOSTRAVE

Marrja e mostrave dhe përgatitja e tyre për testim - sipas GOST 13928. Ruajtja e mostrave nuk lejohet.

2. METODA KOLORIMETRIKE

Metoda kolorimetrike bazohet në aftësinë e proteinave të qumështit në pH nën pikën izoelektrike për të lidhur një ngjyrë acide, duke formuar me të një precipitat të patretshëm, pas heqjes së të cilit matet dendësia optike e tretësirës fillestare të ngjyrosjes në raport me tretësirën që rezulton. zvogëlohet në raport me fraksionin masiv të proteinës.

2.1. Pajisjet, materialet dhe reagentët

Peshore laboratorike të klasës së 4-të të saktësisë me kufirin më të lartë të peshës prej 200 g sipas GOST 24104 *.
_________________
* Që nga 1 korriku 2002, GOST 24104-2001 ka qenë në fuqi.

Dokumenti nuk është i vlefshëm në territorin e Federatës Ruse. E vlefshme GOST R 53228-2008


Centrifugë për matjen e fraksionit masiv të yndyrës së qumështit sipas dokumentacionit normativ dhe teknik.

Kolorimetër laboratorik fotoelektrik me filtër drite për nxjerrjen në pah të rajonit spektral prej 590 nm me kuveta me gjatësi pune 10 mm ose spektrofotometër me gjatësi vale 590 nm.

Analizator potenciometrik me një diapazon matje 2-3 njësi. pH me vlerë pjestimi 0,05 njësi. pH.

Termometër prej xhami merkuri me një diapazon matjeje 0-100 °C, me vlerë ndarjeje 0.5 ose 1.0 °C, me një diferencë gabimi ±1 °C sipas GOST 28498.

Tapa koni gome N 16 ose 19 sipas dokumentacionit normativ dhe teknik.

Qëndroni për provëza.

Filtra letre.

Tubat e provës P1, P2, P4-25 sipas GOST 25336.

Gypat B ose VF sipas GOST 25336.

Pipetat 1-2-1, 2-2-1, 4-2-1, 5-2-1, 2-2-20 sipas GOST 29169.

Balonat 1-2-50, 1-2-200, 1-2-500, 1-2-2000, 2-2-50, 2-2-200, 2-2-500, 2-2-2000 sipas GOST 1770.

Shishe xhami e errët me kapacitet 2000 cm sipas dokumentacionit normativ dhe teknik.

Bojë "Amido black 10 B" (1-amino-2,7-bis (-nitrofenilazo)-8-hidroksinaftalen-3,6-acid disulfonik kripë disodium) sipas TU 6-09-05-557*, shkalla analitike a .
________________
* Specifikimet e përmendura më poshtë nuk janë dhënë. Shikoni lidhjen për më shumë informacion. - Shënim i prodhuesit të bazës së të dhënave.

Acidi citrik sipas GOST 3652, kimikisht i pastër ose h.d.a.

Ortofosfat natriumi i dyzvendësuar, 12-ujë sipas GOST 4172, kimikisht i pastër. ose h.d.a. ose otofosfat natriumi i dyzëvendësuar, kimikisht i pastër. ose h.d.a.

Acidi sulfurik sipas GOST 4204, kimikisht i pastër ose h.d.a.

Hidroksid natriumi sipas GOST 4328, kimikisht i pastër ose h.d.a.

Ujë i distiluar sipas GOST 6709.

2.2. Përgatitja për matje

2.2.1. Përgatitja e tretësirës buferike

Peshoni 31,70 g acid citrik dhe 8,40 g ortofosfat natriumi. Rezultati i peshimit regjistrohet i rrumbullakosur në shifrën e dytë dhjetore. Reagentët vendosen në një enë 500 ml dhe në të shtohen 400 ml ujë. Balona nxehet në një temperaturë mbi 70 °C. Pastaj përmbajtja e balonës përzihet derisa substancat të treten plotësisht dhe të ftohen në një temperaturë prej (20 ± 2) °C.

2.2.2. Përgatitja e tretësirës së ngjyrosjes

Një pjesë prej 4,60 g të bojës, e peshuar deri në 0,01 g, vendoset në një enë 500 ml dhe i shtohen 200 ml ujë. Balona nxehet në një temperaturë jo më të madhe se 70 ° C dhe më pas përmbajtja e saj përzihet derisa boja të tretet.

Tretësira filtrohet përmes një filtri letre në një balonë vëllimore me kapacitet 2000 ml Filtri lahet me ujë derisa të hiqen gjurmët e bojës.

Tretësira buferike e përgatitur sipas pikës 2.2.1 transferohet në të njëjtën balonë.

Përmbajtja e balonës ftohet në një temperaturë prej (20 ± 2) °C. Balona mbushet deri në pikën me ujë, mbyllet me tapë gome dhe përmbajtja e saj përzihet duke e përmbysur balonën të paktën gjashtë herë.

Zgjidhja duhet të ketë (2,3 ± 0,1) njësi. pH. Nëse pH e tretësirës nuk korrespondon me këtë vlerë, korrigjoni atë duke shtuar acid sulfurik të koncentruar ose hidroksid natriumi. Tretësira, e holluar 50 herë, duhet të ketë një densitet optik (0,82 ± 0,02) në një gjatësi vale prej 590 nm në një kuvetë me gjatësi pune 10 mm. Nëse densiteti optik i tretësirës nuk korrespondon me këtë vlerë, atëherë korrigjoni atë duke shtuar një zgjidhje tampon ose një tretësirë ​​ngjyruese.

Zgjidhja duhet të përdoret vetëm pas 12 orësh ekspozimi.

Tretësira duhet të ruhet në frigorifer në një shishe qelqi të errët për jo më shumë se 4 muaj, duke kontrolluar dhe korrigjuar çdo javë pH dhe vlerat e densitetit optik.

2.3. Marrja e matjeve

2.3.1. 1 cm3 qumësht vendoset në një epruvetë qelqi me pipetë, shtohet 20 cm3 tretësirë ​​ngjyruese dhe pasi të mbyllet epruveta me tapë gome, përzihet përmbajtja e tij duke e kthyer epruvetën 2 deri në 10 herë.

Duhet të shmanget tundja pasi kjo do të formojë një shkumë të vështirë për t'u thyer.

2.3.2. Vendoseni tubin në një centrifugë dhe centrifugoni në 25 s (1500 rpm) për 10 minuta ose në 16 s (1000 rpm) për 20 minuta.

2.3.3. Hidhni me pipetë 1 cm nga lëngu supernatant, vendoseni në një enë vëllimore me kapacitet 50 ml, shtoni balonën në shenjën me ujë dhe përzieni përmbajtjen. Në mënyrë të ngjashme, tretësira e punës së bojës hollohet 50 herë.

2.3.4. Dendësia optike e tretësirës së holluar të ngjyrosjes matet në një fotoelektrokolorimetër ose spektrofotometër në lidhje me përmbajtjen e holluar të balonës vëllimore.

2.3.5. Pas çdo 24 vëzhgimesh, kuveta lahet me një tretësirë ​​tampon të përgatitur sipas paragrafit 2.2.1.

2.4. Përpunimi i rezultateve

2.4.1. Pjesa masive e proteinës, %, llogaritet me formulë

ku është dendësia optike e matur, njësi. optike dendësia;

7,78 - koeficienti empirik, %/njësi. optike dendësia;

1.34 - koeficienti empirik, %.

2.4.2. Kufiri i gabimit të lejuar të rezultatit të matjes në diapazonin e fraksionit të masës së proteinave prej 2.5-4.0% është ±0.1% e fraksionit të masës së proteinave me një probabilitet besimi prej 0.80 dhe një mospërputhje midis dy matjeve paralele jo më shumë se 0.013 njësi të densitetit optik ose jo më shumë se 0, 1% pjesë masive e proteinës.

Mesatarja aritmetike e rezultateve të llogaritjes së dy vëzhgimeve paralele merret si rezultat përfundimtar i matjes, duke e rrumbullakosur rezultatin në shifrën e dytë dhjetore.

Nëse ka një mospërputhje midis rezultateve të matjeve të marra në laboratorë të ndryshëm me më shumë se 0.1% të fraksionit masiv të proteinës, matja kryhet sipas GOST 23327.

3. METODA REFRAKTOMETRIKE

Metoda refraktometrike bazohet në matjen e indekseve refraktive të qumështit dhe hirrës pa proteina të marra nga e njëjta mostër qumështi, diferenca ndërmjet të cilave është drejtpërdrejt proporcionale me fraksionin masiv të proteinave në qumësht.

3.1. Pajisjet, materialet dhe reagentët

Kompleti i fraksionit masiv të proteinave, i përbërë nga:

një refraktometër me një shkallë të fraksionit masiv të proteinës në intervalin 0-15%, me një vlerë ndarjeje prej 0,1%;

banjë me ujë të tipit të mbyllur për shishka.

Centrifugë për matjen e pjesës masive të yndyrës në qumësht sipas dokumentacionit normativ dhe teknik.

Stufa elektrike me fuqi nominale 1000 W sipas GOST 14919.

Fols 1-1000-2, 2-1000-2 sipas GOST 1770.

Pipetat 1-2-1, 2-2-1, 2-2-5, 4-2-1, 5-2-1 sipas GOST 29169.

Shishe nga një tub qelqi për ilaçe, tip FO, me kapacitet 10 cm sipas TU 64-2-10.

Tapa gome sipas dokumentacionit normativ dhe teknik.

Klorur kalciumi 2-ujë sipas TU 6-09-5077.

Ujë i distiluar sipas GOST 6709.

Lejohet përdorimi i instrumenteve të tjera matëse me karakteristika metrologjike dhe pajisje me karakteristika teknike jo më të këqija, si dhe reagentë me cilësi jo më të ulët se sa më sipër.

3.2. Përgatitja për matje

Një pjesë prej 40,0 g klorur kalciumi vendoset në një balonë me kapacitet 1000 cm3, i shtohen 500 cm3 ujë dhe përzihet derisa kripa të tretet plotësisht. Përmbajtja e balonës nxehet në një temperaturë prej (20 ± 2) °C dhe rregullohet në shenjën me ujë.

3.3. Marrja e matjeve

3.3.1. Hidhni në 3 shishe qumësht 5 cm, shtoni 6 pika tretësirë ​​të klorurit të kalciumit. Shishet mbyllen dhe përmbajtja e tyre përzihet duke përmbysur shishet.

Vendosini shishet në një banjë uji, duke derdhur ujë në banjë në mënyrë që niveli i tij të arrijë gjysmën e lartësisë së shisheve. Banja mbyllet, vendoset në sobë elektrike, uji në banjë vihet në valë dhe zihet të paktën 10 minuta. Pa e hapur vaskën, derdhni ujë të nxehtë nëpër vrimat në kapak, derdhni ujë të ftohtë në banjë dhe mbajeni në të për të paktën 2 minuta.

Hapni banjën, hiqni shishet dhe thyeni mpiksjen e proteinave duke tundur fuqishëm shishet.

Flakonet vendosen në një centrifugë dhe centrifugohen për të paktën 10 minuta. Serumi transparent që rezulton merret me pipetë dhe aplikohet në prizmin matës të refraktometrit 1-2 pika. Mbyllni ndriçimin e prizmit matës.

Duke vëzhguar përmes okularit të një refraktometri, ngjyrosja e kufirit të dritës dhe hijes hiqet me një korrigjues të veçantë. Për të përmirësuar mprehtësinë e kufirit, matja kryhet 1 min pas aplikimit të serumit në prizëm, pasi gjatë kësaj kohe ajri hiqet nga kampioni dhe sipërfaqja e prizmit ndriçues laget më mirë.

3.3.2. Kryeni të paktën 3 vëzhgime në shkallën "Proteina". Hiqeni serumin nga prizmi i refraktometrit, lajeni me ujë dhe fshijeni me letër filtri.

3.3.3. 2 pika nga qumështi i hulumtuar vendosen në prizmin matës dhe bëhen të paktën 5 vëzhgime në shkallën "Proteinë", pasi mprehtësia e kufirit të dritës dhe hijes në qumësht është më e keqe se në hirrë.

3.3.4. Llogaritni mesataren aritmetike të rezultateve të vëzhgimeve për hirrën dhe qumështin.

3.4. Përpunimi i rezultateve

3.4.1. Pjesa masive e proteinave në qumësht,%, llogaritet me formulë

ku është mesatarja aritmetike e rezultateve të vëzhgimit në shkallën "Proteina" për qumështin, %;

- vlera mesatare aritmetike e rezultateve të vëzhgimit në shkallën "Proteina" për serumin, %.

3.4.2. Kufiri i gabimit të lejuar të rezultatit të matjes është ± 0,1% e fraksionit masiv të proteinës me një nivel besimi prej 0,80 dhe mospërputhja midis dy përcaktimeve paralele nuk është më shumë se 0,1% e fraksionit masiv të proteinës.

Mesatarja aritmetike e rezultateve të dy llogaritjeve paralele të fraksionit të masës së proteinave merret si rezultat përfundimtar i matjes, duke e rrumbullakosur rezultatin në numrin e dytë dhjetor.

Nëse ka një mospërputhje midis rezultateve të matjeve të marra në laboratorë të ndryshëm me më shumë se 0.1% të fraksionit të masës së proteinave, matja kryhet sipas GOST 23327.

4. METODA E TITRIMIT FORMOL

Metoda përdoret me marrëveshje me furnizuesin.

Metoda e titrimit formal bazohet në neutralizimin e grupeve karboksil të acideve monoaminodikarboksilike të proteinave me një zgjidhje të hidroksidit të natriumit, sasia e të cilit e shpenzuar për neutralizim është proporcionale me fraksionin masiv të proteinave në qumësht.

4.1. Pajisjet, materialet dhe reagentët

Analizator potenciometrik me diapazon matës nga 4 deri në 10 njësi. pH me vlerë pjestimi 0,05 njësi. pH.

Njësi titruese automatike, e pajtueshme me një titues potenciometrik dhe që ka një shpërndarës solucioni (buretë) me një kapacitet prej të paktën 5 cm3 me një vlerë ndarjeje jo më shumë se 0,05 cm3.

Kronometri mekanik i tipit SOPir i klasit 3.

Fols 1-1000-2, 2-1000-2 sipas GOST 1770.

Pipetat 2-2-5, 2-2-20 sipas GOST 29169.

Gypat VK sipas GOST 25336.

Gota V-1-50, V-2-50 sipas GOST 25336.

Hidroksid natriumi, titër standard sipas TU 6-09-2540, tretësirë ​​me përqendrim molar 0,1 mol/dm.

Formaldehid, tretësirë ​​ujore me një pjesë masive të formaldehidit 30% sipas Fondit Shtetëror të BRSS, N 619.

Ujë i distiluar sipas GOST 6709.

Lejohet përdorimi i instrumenteve të tjera matëse me karakteristika metrologjike dhe pajisje me karakteristika teknike jo më të këqija, si dhe reagentë me cilësi jo më të ulët se sa më sipër.

4.2. Përgatitja për matje

4.2.1. Përgatitja e instrumentit

Lidheni njësinë e titrimit automatik me analizuesin sipas udhëzimeve të dhëna me njësinë. Më pas lidhni njësinë dhe analizuesin në rrjet dhe ngrohini për 10 minuta.

Mbushni shpërndarësin e njësisë së titrimit automatik me tretësirë ​​të hidroksidit të natriumit.

Sipas udhëzimeve të bashkangjitura në analizatorin potenciometrik, rregullojeni këtë të fundit në një gamë të tillë matjesh të pH, që do të përfshinte pH=9.

Sipas udhëzimeve të bashkangjitura në njësinë e titrimit automatik, vendoseni në një pikë ekuivalence prej 9 njësi pH, hidhni tretësirën duke filluar nga pH=4 dhe mbajeni për 30 sekonda pasi të keni arritur pikën e ekuivalencës.

4.2.2. Përcaktimi i korrigjimit të rezultateve të matjes së pjesës masive të proteinës me metodën formale titrimi

Për të përcaktuar korrigjimin e rezultateve të matjes së fraksionit masiv të proteinës me metodën e titrimit formal, matja e njëkohshme e fraksionit masiv të proteinës në të njëjtën mostër qumështi kryhet me metodën e titrimit zyrtar dhe sipas GOST 23327.

Matjet kryhen në një kampion qumështi mesatar të marrë nga përzierja e mostrave të qumështit me peshë të barabartë të marra nga ferma të ndryshme. Në të njëjtën kohë, mostra mesatare duhet të formohet nga së paku 75% e të gjitha fermave - shpërndarësve të qumështit.

Matjet, si sipas GOST 23327, ashtu edhe me metodën e titrimit të formolit, kryhen në gjashtë përsëritje.

Korrigjimi, %, llogaritet me formulë

ku është vlera mesatare aritmetike e pjesës masive të proteinës, e marrë sipas GOST 23327,%;

- vlera mesatare aritmetike e fraksionit masiv të proteinës i përftuar me titrim formal, %.

Përcaktimi i ndryshimit kryhet të paktën një herë në dekadë.

4.3. Marrja e matjeve

4.3.1. Në një gotë vendosen 20 cm qumësht dhe një shufër magnetike përzierëse. Xhami vendoset në një përzierës magnetik, motori i përzierësit është i ndezur dhe elektrodat e analizuesit potenciometrik janë zhytur në qumësht. Butoni "Start" i bllokut automatik të titrimit është i ndezur dhe pas 2-3 s, butoni "Hold". Në të njëjtën kohë, tretësira e hidroksidit të natriumit fillon të rrjedhë nga shpërndarësi i bllokut në një gotë qumësht, duke e neutralizuar këtë të fundit. Me arritjen e pikës së ekuivalencës (рН=9) dhe skadimit të kohës së ekspozimit (30 s), procesi i neutralizimit ndalon automatikisht dhe sinjali "Fund" ndizet në panelin e bllokut të titrimit automatik. Pas kësaj, butonat "Start" dhe "Hold" fiken, sasia e tretësirës alkali të përdorur për neutralizimin e qumështit përcaktohet para futjes së formaldehidit dhe në gotë shtohen 5 cm3 formaldehid.

Pas 2-2,5 minutash, butonat "Start" dhe "Hold" ndizen sërish. Në fund të procesit, përcaktohet sasia totale e tretësirës së përdorur për neutralizim.

4.3.2. Paralelisht, kryhet një eksperiment kontrolli për të neutralizuar një përzierje prej 20 cm3 ujë dhe 5 cm3 tretësirë ​​formaldehidi.

4.4. Përpunimi i rezultateve

4.4.1. Pjesa masive e proteinës, %, llogaritet me formulë

ku është sasia totale e tretësirës së përdorur për neutralizim, cm;

- sasia e tretësirës së përdorur për neutralizimin para futjes së formaldehidit, cm;

- sasia e tretësirës së përdorur për eksperimentin e kontrollit, cm;

0,96 - koeficienti empirik, %/cm;

- korrigjimi i rezultatit të matjes së pjesës masive të proteinës, %.

4.4.2. Kufiri i gabimit të lejuar të rezultatit të matjes në diapazonin e fraksionit të masës së proteinës prej 2,2-4,0% është ±0,15% e fraksionit të masës së proteinës me një probabilitet besimi prej 0,80 dhe mospërputhja midis dy matjeve paralele nuk është më shumë se 0,2% e fraksioni masiv i proteinave.

Mesatarja aritmetike e rezultateve të dy llogaritjeve paralele merret si rezultat përfundimtar i matjes, duke rrumbullakosur rezultatin në shifrën e dytë dhjetore.

Nëse ka një mospërputhje midis dy rezultateve të matjes të marra në laboratorë të ndryshëm me më shumë se 0,15% të fraksionit të masës së proteinës, matja kryhet sipas GOST 23327.



Teksti elektronik i dokumentit
përgatitur nga Kodeks Sh.A dhe verifikuar kundër:
publikim zyrtar
Qumështi dhe produktet e qumështit.
Metodat e përgjithshme të analizës: Sht. GOST. -
M.: Standartinform, 2009